En este paso, se produce una primer carga de energía en forma del sacrificio de un grupo fosfato del ATP a la molécula de PGA que ya tenía un grupo fosfato propio, es decir, la molécula resultante tendrá dos grupos fosfato y un mayor nivel energético.
Cabe recordar que este proceso se da con cada uno de los PGA, y por cada ciclo se producen dos PGA, por lo anterior se puede decir que para fijar un solo carbono se debe sacrificar en este paso dos moléculas de ATP.
La enzima que cataliza esta reacción se denomina quinasa de fosfoglicerato, cuya función primordial es realizar una transferencia reversible de grupos fosfato.