Sin duda el elemento más llamativo y de mayor valor de toda la iglesia del Buen Suceso es el retablo Mayor, una obra auspiciada y patrocinada por don José de Villar y encargada a José Fernando de Medinilla. Es una pieza única en Sevilla. Se trata del único "árbol de Jesé" que tenemos en un retablo mayor en nuestra ciudad.
El retablo Mayor tiene una calle central dividida en dos partes, una inferior donde se encuentra el camarín de la Virgen del Carmen; y otra superior donde se encuentra la hornacina del profeta Elías.
Esta calle central está rodeada por una estructura con forma de arco triunfal que exalta a la Congregación hospitalaria de los Hermanos Obregones. En el ático podemos ver tres lienzos: el primero ilustra el descubrimiento de la imagen de la Virgen que hicieron dos enfermeros Obregones en una cueva de Tortosa mientras peregrinaban a Roma; el segundo representa la bendición de la imagen por el Papa Paulo V como Virgen del Buen Suceso; y el tercero es la entonación de la Virgen del Buen Suceso en el Hospital de Madrid.
Las restantes pinturas aluden a los antepasados carnales del Redentor, formando un árbol genealógico que culmina en la concepción virginal de María. Todo este conjunto se atribuye al pintor Domingo Martínez, que debió realizarlo con anterioridad al 8 de septiembre de 1730 en cuya festividad mariana se inauguró la iglesia con la presencia del rey Felipe V.
Sobre el arco triunfal tenemos las imágenes de los siguientes personajes bíblicos:
En el arco exterior, comenzando por la base de la izquierda:Abraham, Phares, Booz, Asá, Jonathan, Amón, Jeconías, Sadoc, David (1), Jacob, Mattám, Eliazar, ajim, Abiud, Aran, Manases, Salomón y Judá.
En el arco interior y comenzando por la base de la izquierda: Isaac, Esrom y Aram, Obed, Abiá y Roboam, Ajax, Salatiel y Zorobabel, San José, Eliakim y Azor, Ezequias, Josafat y Joram, Abiv, Aminadab y Nasón, y Jacob.
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